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　　HPLC以它定量分析結(jié)果準(zhǔn)確、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優(yōu)勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。本文就液相色譜儀在實(shí)際操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)及維護(hù)做了簡單介紹。

　　主要部件介紹

　　輸液系統(tǒng)

　　輸液系統(tǒng)主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進(jìn)入柱子前排除氣泡。液相色譜柱的填料顆粒小，通過 2~5 mm 的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。

　　高壓泵按輸液性能可分為恒壓、恒流泵。按機(jī)械結(jié)構(gòu)可分為：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復(fù)柱塞泵。

　　進(jìn)樣器

　　進(jìn)樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為手動、自動進(jìn)樣器兩種。手動進(jìn)樣器一般配有20~100μL的定量環(huán)。

　　色譜柱

　　色譜柱以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進(jìn)行分析樣品的分離工作。

　　色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱。

　　檢測器

　　檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據(jù)標(biāo)物、分析樣色譜圖的出峰時(shí)間、峰面積分別對樣品進(jìn)行定性定量分析。

　　維護(hù)及使用注意事項(xiàng)

　　1.開關(guān)機(jī)操作注意

　　分析準(zhǔn)備工作做好后，依次打開穩(wěn)壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結(jié)束，打開連接儀器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結(jié)束后，關(guān)閉工作軟件，再依次關(guān)閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。

　　2.對流動相的要求

　　為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經(jīng)過過濾雜質(zhì)、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。

　　(1)流動相的物理化學(xué)性能要求

　　對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗(yàn)的靈敏度;流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點(diǎn)要低，以利于制備分離時(shí)樣品的回收;流動相的 PH 值一般應(yīng)在 2~7.5;使用期限不得超過 2 天，否則產(chǎn)生細(xì)菌污染管路。

　　(2)流動相的過濾

　　流動相在使用前都必須經(jīng)過濾，以除去雜質(zhì)微粒。同時(shí)要定期清洗吸濾頭，以防雜質(zhì)通過其進(jìn)入流動相。應(yīng)依據(jù)其是否是水溶性選擇水膜或有機(jī)膜(0.45 μm 或 0.22 μm)，使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。

　　(3)流動相的脫氣

　　流動相必須預(yù)先脫氣，否則易產(chǎn)生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機(jī)溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時(shí)造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。

　　3.色譜柱的維護(hù)及使用注意事項(xiàng)

　　所有分析樣品把pH值調(diào)節(jié)到適合色譜柱的pH值范圍內(nèi)。進(jìn)樣要避免超負(fù)荷，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。手動進(jìn)樣器進(jìn)樣的話，進(jìn)樣時(shí)動作要快速準(zhǔn)確。分析物成分復(fù)雜時(shí)，要在色譜柱前加色譜保護(hù)柱以保護(hù)色譜柱。每次分析工作開始時(shí)，要對色譜柱進(jìn)行平衡，用含10%流動相中的有機(jī)溶劑的水溶液進(jìn)行排氣和沖洗色譜柱和管路，沖洗30分鐘左右，將色譜柱中的純有機(jī)溶劑替換掉，然后再用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡后方可進(jìn)樣。

　　每次分析工作結(jié)束后，一定要立即用一定量的水溶液*沖洗色譜柱中的緩沖鹽液，再用對被測物洗脫能力強(qiáng)的溶劑來沖洗色譜柱，沖洗時(shí)間不能小于1小時(shí)，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的20倍。若不及時(shí)沖洗色譜柱，雜質(zhì)長時(shí)間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。長期這樣，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用，應(yīng)從儀器上取下，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時(shí)注意不要強(qiáng)烈震動、碰撞。

　　4.高壓輸液泵的維護(hù)及使用注意事項(xiàng)

　　每次分析工作結(jié)束后，都應(yīng)及時(shí)清洗泵。當(dāng)有緩沖鹽做流動相時(shí)，緩沖鹽與有機(jī)溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機(jī)相中結(jié)晶損壞泵中各組件。緩沖鹽溶液的濃度不要過高，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時(shí)間使用高濃度的緩沖鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從而保護(hù)柱塞和密封墊。

　　輸液泵工作前要設(shè)置工作壓力范圍，正常工作壓力一般不要超過 30 Mpa，否則經(jīng)常高壓會使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。平時(shí)分析工作要養(yǎng)成記錄壓力的好習(xí)慣，這樣如果工作壓力超過平時(shí)正常壓力的10%~15%，就應(yīng)及時(shí)查找原因。

　　5.紫外檢測器的維護(hù)及使用注意事項(xiàng)

　　紫外檢測器有一定的使用壽命，所以平時(shí)應(yīng)盡量減少氘燈的使用時(shí)間，在柱平衡進(jìn)行一大半之后，在走基線之前，打開檢測器光源;分析結(jié)束后即可關(guān)閉檢測器光源。要保持檢測器四周環(huán)境清潔，實(shí)驗(yàn)室盡量少開窗戶，定期地面進(jìn)行吸塵工作，防止檢測器工作時(shí)由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學(xué)元件上。檢測器池內(nèi)存在氣泡就會產(chǎn)生噪音，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用。

　　應(yīng)定期清洗流通池。如觀察到流通池內(nèi)部無氣泡或臟物，應(yīng)清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機(jī)溶劑沖洗池內(nèi)，以清洗透鏡。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應(yīng)在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑。